مقایسه بیان ژن نوکلئوکپسید ویروس پژمردگی لکه ای گوجه فرنگی در دو سویه باکتری E. coli

از آنجایی که روش­های تولید آنتی بادی برای کاربرد در ویروس­ها دارای محدودیت­هایی می­باشد، بیان پروتئین­ پوششی در سیستم پروکاریوتی به منظور تولید آنتی­ژن انجام می­شود. در پژوهش حاضر ژن نوکلئوکپسید ویروس پژمردگی لکه­ای گوجه فرنگی از یک جدایه بومی در ایران تکثیر شده و پس از همسانه­سازی، قطعه مربوط به ژن نوکلئوکپسید در سازه pTG19TSWV-N با آنزیم­های BamHI و XhoI خارج شد و در حامل بیانی pET32a(+) برش یافته با آنزیم­های  BamHI وXhoI  همسانه­سازی شد. سپس، سازه pET32TSWV-N به سویه­های BL21(DE3) و BL21(DE3) pLysS از باکتری E. coli انتقال یافت. بیان ژن نوکلئوکپسید با استفاده از القای پیشبر با غلظت یک میلی­مولار  IPTG در هر دو سویه صورت گرفت. چهار ساعت پس از القا، محیط­های کشت باکتریایی جمع­آوری شدند و محتوای پروتئینی استخراج شده از دو سویه مذکور در الکتروفورز عمودی بررسی شدند. با توجه به وزن مولکولی پروتئین بیان شده به همراه برچسب­هایی که از پلاسمید به پروتئین اضافه شده بود، پروتئینی به اندازه حدود 48 کیلودالتون در الکتروفورز عمودی مشاهده شد. نتایج این تحقیق حاکی از بیان ژن نوکلئوکپسید در دو سویه مذکور بود در حالیکه بیان پروتئین در سویه باکتریایی BL21(DE3) pLysS نسبت به BL21(DE3)  بیشتر بود.